Пцр диагностика по сперме

Пцр диагностика по сперме

Мочеполовая система » Диагностика » Пцр диагностика по сперме

Чаще всего мужчины сдают на половые инфекции соскоб из уретры. Он исследуется методом ПЦР .Но сдавать можно и другой клинический материал.

Некоторые пациенты сдают сперму, чтобы определить в ней возбудителя инфекционной патологии, подробнее.

Показания к диагностике спермы методом ПЦР

К числу основных показаний к определению инфекций методом ПЦР в сперме относятся:

1. Донорство спермы.

Человек, который становится донором спермы, не должен стать разносчиком венерических инфекций. Поэтому биоматериал тщательно проверяют методом ПЦР на распространенные инфекции.

2. Подозрение на локализацию инфекционного процесса в яичках или предстательной железе.

Диагностику назначают при симптомах орхита, орхоэпидидимита, простатита. При этом в уретре и других половых органах возбудитель может не выявляться.

3. Мужское бесплодие.

При невозможности зачатия ребенка мужчина сдает ряд анализов. Они требуются для оценки фертильности и выяснения причин её нарушения. Одной из возможных причин бесплодия являются инфекции, поражающие ткани яичек, простаты, семявыносящие протоки.

4. Пациент боится сдавать мазок из уретры.

Это не самая приятная процедура. Но если мужчина отказывается от неё, есть альтернатива. В таком случае сдается обычно моча и сперма. Сочетание этих двух исследований позволяет заменить анализ соскоба из уретры.

Сперма собирается после трехдневного полового воздержания. Перед сдачей анализа нужно 3 часа не мочиться. Анализ сдают до начала антибактериального лечения или через несколько дней после отмены препаратов.

Сперму собирают только в стерильный контейнер. Её сдают непосредственно в медицинском учреждении или лаборатории. Нельзя собирать биоматериал посредством полового акта. Сперма сдается методом манструбации.

Суть метода ПЦР заключается в многократном дублировании генетического материала возбудителя, подробнее.

Далее последовательность нуклеотидов в цепочке ДНК сравнивается с эталоном.

Каждая бактерия или вирус обладает уникальным генетическим кодом, который присущ только ему. По этому коду его можно идентифицировать.

После идентификации микроорганизма его можно уничтожить препаратами, к которым он наиболее чувствителен.

ПЦР позволяет выявить микроорганизмы, даже если они содержатся в минимальных концентрациях. Достаточно отдельных фрагментов ДНК, чтобы установить возбудителя. Обычно сперма используется в качестве клинического материала при диагностике инфекций, вызванных однозначно патогенными микроорганизмами.

К примеру, установление факта присутствия в организме мужчин кандид или некоторых типов микоплазм мало о чем не говорит без определения их концентрации.

Эти микроорганизмы есть в структурах мочеполовой системы всегда. А вот обнаружение хламидии, трихомонады и других патогенных организмов является основанием для установления диагноза.

После этого назначается лечение, направленное на уничтожение возбудителя.

Вы можете сдать анализ спермы ПЦР в частных медицинских центрах.

• безболезненность;
• определение половых инфекций не только в уретре, но и во внутренних половых органах;
• возможность выявления более 30 видов возбудителей венерических заболеваний.

Вы получите результаты исследования быстро – уже на следующий день. После выполнения анализа вы можете получить консультацию врача-венеролога. При необходимости он назначит лечение, направленное на уничтожение инфекции в структурах мочеполовой системы.

При необходимости сдачи анализа спермы методом ПЦР в Москве, записывайтесь ежедневно по телефону 8 (495) 9233179.

Пцр диагностику спермы на mycoplasma spp

Микоплазмами называют мельчайшие паразитарные или сапрофитные бактерии, не имеющие клеточной стенки (что делает их нечувствительными к антибиотикам пенициллинового ряда). Микробиологам известно около ста видов микроорганизмов этого семейства, семь из них при определенных обстоятельствах могут вызвать в организме человека различные патологические процессы.

Mycoplasma species населяют женские и мужские урогенитальные органы, инфицирование происходит при незащищенной интимной близости.

Исследователями достоверно доказано, что микоплазменная инфекция может привести к воспалительной реакции в урогенитальном тракте, нарушению продукции эякулята и развитию мужского бесплодия.

Обнаружение генетического материала (ДНК) бактерии в сперме с помощью методики ПЦР имеет высокое диагностическое значение. Данное молекулярно-биологическое исследование позволяет выявить инфицированность мужчины Mycoplasma spp.

Микоплазмы часто являются причиной (около 30% случаев) воспаления мочевыводящего канала — уретрита негонококкового происхождения. Инфекционно-воспалительный процесс затрагивает всю уретру.

Клиническими признаками микоплазмоза является наличие у пациента:

• патологических выделений из пениса;
• покраснения и зуда около отверстия уретрального канала;
• дискомфорта в зоне мошонки;
• болевых ощущений при интимном контакте;
• жжения при мочеиспускании.

Для проведения ПЦР диагностики спермы пациенту необходимо:

1. За 3 суток до собирания биоматериала воздержаться от интимной близости.2. Исключить прием антибактериальных и противомикробных средств, алкоголя, посещение сауны, бассейна, спортзала.3. Ограничить пищевые нагрузки, курение.

4. Собрать сперму после мастурбации в стерильный контейнер.

Показатель нормы ПЦР диагностики спермы: Mycoplasma spp. не обнаружены — отрицательный результат, свидетельствует об отсутствии инфицированности.

Положительный результат — обнаружены Mycoplasma spp. — указывает на микоплазменную инфекцию. В данных исследования указывается количество бактерий в ГЭ/мл (Genome Equivalents — обозначение уровня содержания внеклеточной ДНК в 1 мл биоматериала): 1×10*3 ГE/мл, 2×10*3 ГE/мл.

В этой статье речь пойдет о методе ПЦР для диагностики инфекций, передаваемых половым путем, при анализе спермы (эякулята). Какие инфекции можно определить в сперме, а какие нельзя? Какие еще материалы можно использовать для диагностики инфекций половой системы?

Среди преимуществ ПЦР как метода в сравнении с другими, традиционно используемыми для диагностики инфекционных заболеваний человека (иммуноферментный анализ, бактериологический посев, микроскопия), стоит отметить непосредственное обнаружение инфекционного агента в результате выявления специфического фрагмента ДНК или РНК возбудителя в исследуемом образце, а потому — возможность напрямую идентифицировать возбудителя инфекции, осуществлять раннюю диагностику, например, в инкубационном периоде, диагностировать заболевание не только в острой и хронической формах, но и выявлять скрытые (латентные) формы инфекций, протекающие без выраженных симптомов или бессимптомно, а также проводить скрининговые исследования, направленные как на определение уже имеющейся инфекционной патологии, так и выявление возможного носительства инфекций для оценки принадлежности пациента к группе риска.

Спектр возбудителей, выявляемых методом ПЦР, чрезвычайно широк, в связи с чем наибольшее распространение ПЦР-диагностика получила в гинекологической и урологической практике, в дерматовенерологии.

Для диагностики большинства бактериальных и вирусных инфекций, выявления возбудителей ИППП, вызывающих заболевания, передаваемые половым путём (ЗППП), материалом для исследования служит, в основном, соскобное отделяемое слизистых оболочек мочеполовых органов: соскоб эпителиальных клеток из цервикального канала и поверхности шейки матки у женщин, соскоб из уретры (мочеиспускательного канала), выделения из половых органов — у мужчин и женщин. При обследовании на некоторые виды инфекций (ВИЧ, гепатиты В и С, вирус Эпштейна-Барр и др.) для анализа берут кровь. Для выявления цитомегаловирусной и герпетической инфекций можно исследовать мочу. Клиническим материалом для ПЦР-диагностики ИППП у мужчин может служить секрет предстательной железы и эякулят (сперма). В каждом конкретном случае выбор исследуемого биоматериала определяется диагностической задачей исследования.

В данной статье мы подробнее остановимся на диагностике ИППП у мужчин и возможности выявления возбудителей ЗППП и урогенитальных инфекций в эякуляте.

Источник: https://ginekologiya-urologiya.ru/diagnostika/ptsr-diagnostika-po-sperme

Анализ спермы: нормы и расшифровка спермограммы

Заболевания мужской половой системы так же часты, как и женской, но немногие представители сильного пола о них догадываются. Чаще всего мужчины начинают исследовать состояние своего здоровья, когда возникают проблемы с зачатием ребенка, или же в зрелом возрасте, при проблемах с потенцией. В идеале, проводить диагностику здоровья, в т. ч. и мужского, нужно ежегодно.

Желательно это сделать обоим партнерам при планировании беременности, и в обязательном порядке – если есть проблемы с ее наступлением. Кроме стандартной спермограммы, УЗИ половых органов и клинических анализов, врач может назначить такое исследование, как бактериологический посев, исследование на биохимию.

Чем отличаются эти исследования и о чем может рассказать каждое из них?

Исследование на патогенную микрофлору

Как и любая биологическая жидкость человеческого тела, сперма является высокоинформативным материалом для лабораторных исследований.

Это показатель общего физического состояния организма, мужского здоровья и, в первую очередь, способности человека к продолжению рода.

Назначается диагностика на наличие инфекции, которая может присутствовать в сперме, в случае обнаружения у пациента определенных симптомов. К ним относятся:

• любые дискомфортные ощущения или боли при прохождении жидкости по уретре: при мочеиспускании или семяизвержении;
• слишком частые походы в туалет;
• проблемы с мочеиспусканием (боль, задержка, слабая струя мочи и т. д.);
• ощущение зуда и жжения в половом члене;
• любые высыпания, наросты, язвы, покраснения на внешних половых органах;
• кровь или гной в сперме или моче;
• краснота и отек мошонки или полового члена;
• неприятный запах эякулята.

Если подобные симптомы сопровождаются высокой или повышенной температурой, слабостью и лихорадкой, это повод обратиться к урологу и сделать анализ. Стоит помнить, что при наличии сильной иммунной системы и в начальных стадиях болезней, проявления недугов могут отсутствовать.

Но инфекции из организма не исчезают, просто иммунитет не дает им размножаться и поражать другие органы. Такое состояние еще более опасно, т. к. мужчина, не зная об этом, остается носителем вирусов, и способен передавать различные инфекции партнерше при половом, и даже бытовом, контакте. Вот почему важно проверять сперму регулярно, независимо от самочувствия.

Какие инфекции можно выявить при проверке спермы

Чаще всего при анализе эякулята выявляют такие инфекции, как уреаплазма, кокки, кандидоз, гарднерелла, хламидии и трихомонады, вирус папилломы человека, генитальный герпес, гепатиты различных видов, цитомегаловирус.

Анализы делают в несколько этапов. Первый – визуальный осмотр эякулята, при котором важны следующие характеристики: плотность и объемы выделяемой жидкости, цвет, запах, кислотно-щелочной баланс. На втором этапе обследования изучается скорость движения спермиев, их количество в процентах, число лейкоцитов, число незрелых сперматозоидов, а также наличие в них дефектов.

Далее изучается состав кислот в сперме, микроэлементов и других составляющих, и на последнем этапе – специальный тест на наличие антител, содержание вирусов и инфекций.

Исследование проводят двумя способами: бактериологический анализ и методом полимерной цепной реакции.

Чтобы сдать правильно, нужно провести небольшую подготовку к исследованию. Так, за несколько дней до анализа следует воздержаться от половых контактов и мастурбации, не посещать места с высокими температурами (баня, сауна, пляж), не принимать горячие ванны и избегать переохлаждения организма.

Запрещено употребление спиртных напитков, от сигарет также стоит воздерживаться или сократить их количество до минимума. Не рекомендован прием каких-либо лекарств, кроме жизненно необходимых (об этом заранее стоит сообщить лечащему врачу).

Сдать сперму можно в самой клинике, где существует специальная комната. Пациенту выдают стерильную герметичную тару, в которую сразу же помещают эякулят, полотенце или салфетки.

Результаты готовятся в течение 3-7 дней, в зависимости от лаборатории.

Расшифровка полученных результатов проводится только врачом на основании норм показателей, принятых в данной клинике, и параметров, установленных в ходе обследования пациента.

Бактериологический посев семенной жидкости

Разновидностью анализов на инфекции является посев на флору.

Но в отличие от стандартного бактериологического исследования, кроме различных патогенных возбудителей,посев помогает определить не только вирусы, но и их устойчивость к антибиотическим препаратам, что дает возможность быстро подобрать медикаментозные препараты для борьбы с ними. Посев на патогенную флору назначается всем пациентам, имеющим трудности с зачатием ребенка, т. к. многие вирусы способны вызывать бесплодие.

Назначается при подозрении на мужское бесплодие. В том случае, если мужчина обращается к доктору с жалобами на различные недомогания, проводится стандартное исследование на инфекции.

Когда же ставится предварительный диагноз? Только в том случае если пара ведет активную половую жизнь, в течение года не использует средства контрацепции, женщина здорова, а долгожданная беременность не наступает. Подтвердить или опровергнуть данный диагноз может только комплекс различных диагностических мероприятий.

Стоит отметить, что бесплодие не является редким диагнозом: согласно медицинским данным, представители сильного пола страдают от этого недуга так же часто, как и женщины. Посев поможет исследовать лишь одну из возможных причин бесплодия у мужчины – наличие патогенной флоры. Если расшифровка анализов покажет наличие вредных микроорганизмов, потребуется соответствующее медицинское лечение.

Как собрать сперму дома

Чтобы сдать правильно потребуется стандартная подготовка: исключение температурных перепадов, отказ от медикаментов, алкоголя и половых контактов. Можно это сделать и дома, но в этом случае потребуется соблюдение строгих мер сбора биоматериала.

Перед сдачей эякулята, мужчине нужно тщательно вымыть тело. Открывая емкость для сбора спермы, важно не касаться ее внутренних поверхностей, краев и внутренней стороны крышки – всех частей, контактируемых с биоматериалом.

Запрещается собирать с других поверхностей: рук, частей тела, постели, переливать из презерватива и т. д.

Наличие на этих предметах бактерий существенно повлияет на итоговый результат, что приведет к назначению неправильного лечения. Если у мужчины накануне сдачи анализа случилось непроизвольное семяизвержение, то лучше сделать спустя несколько дней.

Один из важных критериев оценки спермы – ее объем, поэтому важно собрать в емкость всю выделенную жидкость. Важно доставить контейнер с эякулятом в лабораторию не позже чем через час после сбора. Хранить сперму запрещено! Если возможности соблюсти все эти требования нет, или пациент не уверен в своих силах, стоит провести исследование непосредственно в самой лаборатории.

Результаты обычно готовятся не менее 4-5 дней. Как только сперма попадает к лаборанту, ее помещают в специальный контейнер, где производится выращивание всех микроорганизмов, которые в ней присутствуют.

Это продолжается 72 часа, после чего вся флора исследуется и разделяется на три группы: патогенная, условно–патогенная и безопасная, природная. Первые два вида микроорганизмов (в случае их обнаружения) исследуются на устойчивость к антибиотикам.

Результаты обследования вносятся в специальный бланк, расшифровка которого проводится лечащим доктором.

Проведя бак посев, можно будет выявить не только стандартных возбудителей инфекций, передающихся половым путем, но и таких заболеваний, как вирус иммунодефицита человека, присутствие контагиозного моллюска, микоплазмоз, сифилис, и различных паразитов.

Исследования эякулята на биохимический состав

Анализ, при котором исследуется наличие и концентрация в эякуляте органических кислот, микро- и макроэлементов, называется биохимическим.

Также анализ спермы способен установить причины, вызывающие бесплодие у пациента, а потому он входит в комплекс обязательных процедур при планировании беременности семейной парой или при лечении фертильности.

Особенностью данного анализа является тот факт, что его желательно проводить дважды, как и спермограмму, но с некоторым временным интервалом.

Также при биохимическом анализе изучается его морфологический состав, а также подвижность сперматозоидов и степень разжижения спермы.

Основные изучаемые параметры

Для проведения биологического исследования берут сперму, выделенную мужчиной в процессе мастурбации. Лучше всего для исследования подходит биоматериал, который несколько дней накапливался в организме пациента (для этого мужчине стоит воздержаться от семяизвержения несколько дней).

Связано это с тем,что в собранной после второго и последующих семяизвержений в сутки, очень мала концентрация необходимых кислот и микроэлементов, а это влияет на результаты исследования и выбор медикаментозной терапии.

Как только соберут, проводят ее исследование на химический состав и концентрацию.

В зависимости от обнаруженных веществ и их количества, можно сделать вывод о правильности работы тех или иных составляющих. Так, на состав эякулята оказывает влияние таких органов, как простата, и т. д.

Практически 70% плазмы спермы синтезируется благодаря семенным пузырькам, они ответственные за выработку таких составляющих, как фруктоза, протеины, аскорбиновая кислота и простагландины. Все эти вещества напрямую влияют на подвижность спермиев, их жизненные функции. Благодаря правильной секреции в эякуляте обеспечивается нужная для выживания кислая среда.

За правильный состав остальных 30% несут ответственность простата и уретральные железы. От деятельности предстательной железы также зависит подвижность сперматозоидов, количество, ее плотность, а также баланс определенных ферментов.

Простата вырабатывает такие составляющие спермы, как:

• лимонная кислота;
• фосфатазы;
• спермин и спермидин;
• простагландинов;
• цинк.

По количеству лимонной кислоты (в норме ее содержание находится в пределах от 2 до 3,5 ммоль/л), судят о правильности работы предстательной железы.

Щелочная и кислая фосфатазы помогают придать сперме правильную плотность, что обеспечит спермиям подвижность. Спермин и спермидин ответственны за правильный кислотно–щелочной баланс эякулята.

А простагландины — за сокращение гладкой мускулатуры. Цинк же отвечает за созревание здоровых и активных сперматозоидов.

Уретральные железы синтезируют слизь, которая очищает уретру от инфекций и готовит ее к проходу спермы. Вторая функция данного секрета – участие в поддержании правильности щелочной среды, что обеспечивает спермиям возможности для правильного развития и функционирования.

Еще один важный параметр семенной жидкости – фруктоза. Это своеобразное питание для сперматозоидов, благодаря которому они зарождаются, развиваются и живут. Если количество фруктозы снижается, уменьшается и количество здоровых, т. е. созревших спермиев, снижается их активность и подвижность.

За синтез фруктозы отвечают семенные пузырьки, а на их работу напрямую влияет гормональный баланс организма пациента.

Выявленный в процессе биохимического исследования недостаток данного вещества, напрямую свидетельствует о нарушениях функции и требует начала исследования на гормоны с последующей гормональной терапией.

В незначительных количествах уровень фруктозы меняется при воспалительных процессах в предстательной железе.

Результаты анализа расшифровываются только лечащим врачом. На их основе он изучит работу основных органов, поставит предварительный диагноз и назначит дополнительные обследования и диагностики. Благодаря биохимии спермы можно выявить не только причины бесплодия, но и дисфункции многих органов тела, а это поможет начать своевременное лечение и полностью избавиться от имеющихся заболеваний.

Е. Кубина

Есть проблемы, запишитесь на прием к врачу.

Источник: https://AnalizyPro.ru/vidy-analizov/analiz-spermyi.html

Анализ спермы ПЦР

Генетические исследования семенной жидкости в широкую практику вошли сравнительно недавно. И за очень короткое время подняли лабораторное дело на качественно новый уровень. Благодаря им появилась возможность диагностировать скрытые формы инфекций.

Предупреждать наследственные заболевания и даже раскрывать преступления. Сделать это позволяет полимеразно-цепная реакция.

ПЦР спермы – доступный анализ, результаты которого обладают высочайшей точностью и достоверностью.

Пцр спермы: в чем суть методики?

Еще со школы многие помнят, что каждый организм, в том числе и человек, являются носителями уникального генетического кода. Исключением из правил являются только однояйцевые близнецы, у которых геном абсолютно идентичен. Уникальные генетические последовательности есть у любого организма.

Современная лабораторная служба может эти последовательности в исследуемом материале искать и находить.

Предположим, в образце методом ПЦР найдут геном, скажем, бледной трепонемы. Это прямо указывает на то, что микроб в организме исследуемого лица есть. Даже если клинические проявления и симптомы на это не указывают.

ПЦР спермы: диагностические возможности

Порой, семенная жидкость предоставляет наиболее ценную информацию о том, какими инфекциями поражен организм мужчины.

Так получается из-за того, что сперма представляет собой смесь компонентов из всех органов мужской половой сферы:

• Простата
• Яички
• Привески яичка

Проще говоря, она дает возможность найти инфекцию внутренних половых органов. Даже тогда, когда в анализах мочи и мазке из уретры все чисто. Анализ спермы являет собой мощный инструмент.

Он позволяет обнаружить даже скрытые и бессимптомные формы множества инфекций:

• Трихомоноз
• Хламидиоз
• Гонорея
• Микоплазмоз
• Сифилис
• Грибковые инвазии и др.

Кроме возбудителей венерических заболеваний, выявляются другие патогенные микроорганизмы. Это кишечная палочка, весь спектр стафилококков и стрептококков, клебсиеллы и другие. Правда, ПЦР спермы будет бесполезен в отношении инфекций, передающихся контактным путем – герпес, папилломавирус.

Для чего нужен анализ ПЦР спермы?

Нетрудно догадаться, что методика очень востребована в дерматовенерологии. Так как позволяет находить возбудителей, затаившихся в яичках и простате. В этих случаях традиционный мазок из уретры и трехстаканная проба мочи не информативны из-за «глубокого» расположения инфекции. Зато сперма предоставляет всю необходимую информацию именно из этих отделов.

Благодаря ПЦР отпадает необходимость в инвазивной биопсии. Коей раньше пользовались при поиске возбудителей орхита, простатита и эпидидимита. Причем кроме самого факта инфицирования, можно определить активность заболевания. Так как подсчитывается количество обнаруженных патогенных ДНК.

Еще важна роль этой методики в диагностике мужского бесплодия. Изучение генной информации сперматозоидов позволяет выявить мутации и хромосомные аномалии. Они затрудняют оплодотворение яйцеклетки, либо влекут за собой нежизнеспособность плода.

Подготовка к анализу ПЦР спермы

Как пройти исследование? Для начала нужно обратиться к врачу-дерматовенерологу. И уточнить, так ли необходимо сделать ПЦР спермы.

Это удовольствие не из дешевых и, возможно, без него можно обойтись. Если специалист считает нужным обследовать мужчину, то анализ назначается. Заодно человек получает и рекомендации, как подготовиться, чтоб получить наиболее достоверный результат.

Общие требования такие:

• Воздержание от алкоголя на протяжении недели
• На это же время – отказ от половой жизни
• Отсутствие признаков инфекции со стороны уретры, мочевого пузыря и почек
• Полное общее благополучие – нормальная температура тела и хорошее самочувствие
• Запрещена интенсивная физическая активность, сауна, баня: после них должно пройти от 3 до 7 дней
• Не делать массаж простаты как минимум за 48 часов до сбора спермы

Иногда заранее проводится провокационная подготовка с целью обострить хроническую инфекцию. Чтоб ее было легче выявить и затем победить.

Способ достижения эякуляции – мастурбация. Сперму собирают в специальный стерильный контейнер с завинчивающейся крышкой.

В принципе, конкретную модель пластиковой баночки дает пациенту врач венеролог или уролог. Собрать можно дома и затем доставить образец в диагностический центр.

При этом нужно тщательно соблюсти ряд рекомендаций:

• Перед началом процедуры обязательно обмыть половые органы теплой водой с мылом и высушить
• Открывать контейнер только перед самой эякуляцией
• Не прикасаться к краям баночки никакими частями тела: ни руками, ни половым органом
• Запрещено стряхивать в контейнер эякулят с рук или других частей тела и поверхностей (с одежды и т.д.)
• Черным перманентным маркером на стенке сосуда пишут свои данные, дату и время сбора
• Собранный материал необходимо как можно скорее доставить в лабораторию. В идеале, на это должно уйти от 20 минут до часа
• Все это время должен соблюдаться температурный режим в пределах 20°С

В большинстве современных клиник есть специально оборудованные комнаты. Там мужчине легче подготовитьсяканализу и сдать сперму на ПЦР. Тогда образец поступает в работу без задержек, что значительно повышает достоверность результата.

Что потом?

Обычно, результат готов через день после сдачи анализа. Исследование проходит полностью в автоматическом режиме. Участие человека требуется только чтоб поставить пробы в аппарат и запустить его.

Таким образом, полностью исключается вероятность человеческой ошибки, а результаты сохраняются в цифровом виде. Их можно распечатать на бумаге и/или переслать по электронной почте, что очень удобно. Данные необходимо показать специалисту, который расшифровывает и объясняет все показатели. Затем, как правило, назначается лечение, и в конце курса проводится контрольная ПЦР спермы.

При необходимости сдать анализ ПЦР спермы на инфекции обращайтесь к грамотным венерологам нашего медицинского центра.

Источник: https://venerologiya.moscow/content/analiz-spermy-pcr

Анализ эякулята (спермограмма)

Основной целью исследования эякулята является определение способности спермы к оплодотворению и выявление заболеваний и/или патологических процессов, вызвавших соответствующие поражения. Исследование спермы – неотъемлемая часть диагностики бесплодия.

Примерно в 47% случаев причиной бездетности семейных пар является мужчина. Причиной бесплодия мужчин могут быть заболевания яичек, простаты, нарушения проводимости семявыводящих путей, заболевания и пороки развития уретры.

Исследование семенной жидкости также является одним из тестов при диагностике гормональных расстройств, заболеваний половых органов или пороков их развития.

В норме эякулят представляет собой взвесь сперматозоидов в секрете яичек и их придатков, которая к моменту эякуляции смешивается с секретом предстательной железы, семенных пузырьков и луковично-уретральных желез.

Сперматозоиды составляют около 5% объема спермы, они образуются в семенниках. Приблизительно 60% объема спермы образуется в семенных пузырьках. Это вязкая, нейтральная или слегка щелочная жидкость, часто желтая или даже сильно пигментированная из-за высокого содержания рибофлавина.

Простата производит примерно 20% объема семенной жидкости. Эта жидкость, похожая на молоко, имеет слабокислую реакцию (рН около 6,5), в основном из-за высокого содержания лимонной кислоты. Простатический секрет также богат кислой фосфатазой и протеолитическими ферментами, считается, что протеолитические ферменты отвечают за коагуляцию и разжижение семенной жидкости.

Менее 10–15% объема спермы образуется в придатках яичек, семявыводящих протоках, бульбоуретральных и уретральных железах.

Стандартная спермограмма оценивает физические (макроскопические) и микроскопические параметры эякулята (Табл., рис. 1-3).
Показатель Характеристика Интерпретация

Цвет	Серовато-беловатый, слегка опалесцирующий	Норма
Почти прозрачный	Концентрация сперматозоидов очень низка
Красновато-коричневатый	Присутствие эритроцитов
Зеленоватый	Пиоспермия
Желтоватый	Желтуха, прием некоторых витаминов, при длительном воздержании
Реакция рН	7,2–7,8, слабо-щелочная	Норма
Ниже 7,0	В образце с азооспермией – наличие обструкции или врожденного двустороннего отсутствия семявыносящих протоков
9,0–10,0, щелочная	Патология предстательной железы
Объем	2–6 мл	Норма
Менее 1 мл	Андрогенная недостаточность, эндокринные заболевания, сужения и деформации пузырьков, семявыводящих путей

Условия взятия и хранения образца

Эякулят должен быть получен после, как минимум, 48 ч, но не более 7 дней полового воздержания.

Эякулят, полученный путем мастурбации, необходимо собрать полностью и держать в тепле (20–40 оС). Образец стабилен один час, однако в случае, если подвижность сперматозоидов патологически низкая (менее 25% сперматозоидов с быстрым линейным поступательным движением), срок между получением и анализом образца следует свести к минимуму.

Метод исследования

Макроскопическое исследование – определение консистенции, объема, запаха, цвета, вязкости и рН эякулята.

Сперма, полученная при эякуляции, густая и вязкая, что обусловлено свертыванием секрета семенных пузырьков. В норме при комнатной температуре образец эякулята должен разжижаться в течение 60 мин.

Если эякулят длительное время остается вязким, полувязким или вообще не разжижается, то можно предполагать воспаление предстательной железы. В норме объем эякулята составляет 2–6 мл.

Количество менее 1,0 мл характерно для андрогенной недостаточности, эндокринных заболеваний, сужения и деформации пузырьков, семявыводящих путей. Максимальный объем может достигать 15 мл. Объем эякулята не влияет на фертильность.

Запах нормального эякулята специфический и обусловлен спермином (напоминает запах «свежих каштанов»). Специфический запах становится слабым или отсутствует при закупорке выводных протоков предстательной железы. При гнойно-воспалительных процессах запах спермы обусловлен продуктами жизнедеятельности бактерий, вызвавших воспалительный процесс.

Микроскопическое исследование – изучение в нативном препарате подвижности сперматозоидов и наличия агглютинации, подсчет количества сперматозоидов в камере Горяева, изучение морфологии сперматозоидов, клеток сперматогенеза и дифференциальная диагностика живых и мертвых сперматозоидов в окрашенных препаратах.

Микроскопическое исследование эякулята проводят после полного его разжижения

Для оценки подвижности сперматозоидов рекомендуется использовать простую систему классификации по категориям. Для классификации 200 сперматозоидов последовательно просматривают в 5 полях зрения микроскопа (Рис. 1).

Подвижность каждого сперматозоида классифицируют по категориям, используя следующие критерии:

а) быстрое поступательное движение;

b) медленное и вялопоступательное движение;

c) непоступательное движение;

d) неподвижные сперматозоиды.

Сначала подсчитывают все сперматозоиды категорий а и b в ограниченном участке поля зрения или, если концентрация сперматозоидов низкая, во всем поле зрения (%). Далее в той же области подсчитывают сперматозоиды с непоступательным движением (категория с) (%) и неподвижные сперматозоиды (категория d) (%).

Определять подвижность можно с подсчетом в камере Горяева. Сперму разводят в 20 раз физиологическим раствором, в камере смотрят только неподвижные и малоподвижные сперматозоиды.

Расчет ведут по формуле:

Х = А – (В + С), где,

А – общее количество сперматозоидов;

В – количество малоподвижных сперматозоидов;

С – количество неподвижных сперматозоидов.

Отсюда количество активно подвижных сперматозоидов в процентах составляет (Y):

Y = Х * 100/А.

Подвижность сперматозоидов зависит от времени года и суток. Имеются данные, что весной происходит снижение подвижности сперматозоидов (сезонные колебания). При наблюдении за количеством активно-подвижных сперматозоидов в течение суток было отмечено увеличение их количества во второй половине дня (суточные ритмы).

Снижение подвижности сперматозоидов ниже нормы – астенозооспермия. Незначительной степени астенозооспермии – количество активно- и малоподвижных сперматозоидов c поступательным движением в сумме составляет менее 50%, но более 30%.

Оценка агглютинации сперматозоидов. Под агглютинацией сперматозоидов подразумевают склеивание подвижных сперматозоидов между собой головками, хвостами или головок с хвостами.

Склеивание неподвижных сперматозоидов друг с другом или подвижных сперматозоидов с нитями слизи, другими клетками или остатками клеток следует считать и регистрировать не как агглютинацию, а как неспецифическую агрегацию.

При исследовании регистрируют тип агглютинации (головками, хвостами, смешанный вариант). Можно использовать полуколичественный метод оценки степени агглютинации от «–» (отсутствие агглютинации) до «+++» (тяжелая степень, при которой все подвижные сперматозоиды подвержены агглютинации).

В норме склеиваются не более 3–5%. Если количество агглютинированных сперматозоидов составляет 10–15%, можно говорить о понижении их оплодотворяющей способности.

Подсчет общего количества сперматозоидов проводят в камере Горяева. Общее количество сперматозоидов в эякуляте рассчитывают, умножая количество сперматозоидов в 1мл спермы на объем выделенной спермы.

Нормоспермия – у здорового мужчины в 1 мл эякулята содержится более 20 млн. сперматозоидов.

Полизооспермия – количество сперматозоидов в 1 мл эякулята превышает 150 млн.

Олигозооспермия – в 1 мл эякулята содержится менее 20 млн. сперматозоидов.

Азооспермия – отсутствие сперматозоидов в эякуляте.

Аспермия – в доставленной жидкости нет сперматозоидов и клеток сперматогенеза.

Оценка жизнеспособности сперматозоидов. Для оценки жизнеспособности сперматозоидов смешивают на предметном стекле одну каплю свежего эякулята с каплей стандартного красителя эозина.

Живые сперматозоиды в таких препаратах не окрашиваются (белые); мертвые сперматозоиды окрашиваются в красный цвет, т.к. повреждены их плазматические мембраны. Под жизнеспособностью подразумевают долю (в процентах) «живых» сперматозоидов.

Жизнеспособность следует оценивать, если процент неподвижных сперматозоидов превышает 50%.

Оценка жизнеспособности может служить контролем точности оценки подвижности сперматозоидов, поскольку процент мертвых клеток не должен превышать (с учетом ошибки подсчета) процента неподвижных сперматозоидов. Наличие большого количества живых, но неподвижных сперматозоидов, может указывать на структурные дефекты жгутиков. Сумма мертвых и живых сперматозоидов не должна превышать 100%.

Характеристика клеточных элементов эякулята. Обычно эякулят содержит не только сперматозоиды, но и другие клетки, которые в совокупности обозначают, как «круглые клетки». К их числу относят эпителиальные клетки мочеиспускательного канала, клетки предстательной железы, незрелые половые клетки и лейкоциты. В норме эякулят не должен содержать более 5*106 круглых клеток/мл.

В большинстве случаев эякулят человека содержит лейкоциты, в основном нейтрофилы. Повышенное содержание этих клеток (лейкоспермия) может свидетельствовать о наличии инфекции и о плохом качестве сперматозоидов. Число лейкоцитов не должно превышать 1106/мл. Подсчет ведут в камере Горяева аналогично подсчету сперматозоидов.

Эякулят кроме лейкоцитов может содержать незрелые половые клетки (клетки сперматогенеза) на разных стадиях созревания: сперматогоний, сперматоцит I порядка, сперматоцит II порядка, сперматид. (рис. 2)

Наличие в эякуляте различных типов незрелых клеток сперматогенеза обычно говорит о его нарушении. Избыток этих клеток является следствием нарушения функции семенных канальцев, в частности, при сниженном сперматогенезе, варикоцеле и патологии клеток Сертоли.

Оценка морфологии сперматозоидов. Для анализа используют мазок, окрашенный гистологическими красителями (гематоксилин, Романовский-Гимза и др.), в котором производят последовательный подсчет 200 сперматозоидов (однократный подсчет 200 сперматозоидов предпочтительней двукратного подсчета 100 сперматозоидов) и выражают в процентах количество нормальных и патологических форм (Рис. 3).

Головка сперматозоида должна быть овальной формы. Отношение длины головки к ее ширине должно составлять от 1,5 до 1,75. Должна быть видна хорошо очерченная акросомная область, составляющая 40–70% площади головки.

Шейка сперматозоида должна быть тонкой, составлять 1,5 длины головки сперматозоида и прикрепляться к головке вдоль ее оси. Размеры цитоплазматических капель не должны превышать 1/2 размера головки нормального сперматозоида.

Хвост должен быть прямым, одинаковой толщины на всем протяжении и несколько уже в средней части, не закрученным и иметь длину около 45 мкм. Отношение длины головки к длине хвоста у нормальных сперматозоидов 1:9 или 1:10.

Дефекты головки: большие, маленькие, конические, грушевидные, круглые, аморфные, с вакуолями в области хроматина; головки с маленькой акросомальной областью, вакуолизированной акросомой, с несимметрично расположенной акросомой; двойные и множественные головки, головки с компактным строением хроматина и т.д.

Дефекты шейки и средней части: «склоненная» шейка (шейка и хвост образуют угол 90° к длинной оси головки), асимметричное прикрепление средней части к головке, утолщенная или неравномерная средняя часть, патологически тонкая средняя часть (отсутствие митохондриальной оболочки) и их любая комбинация.

Дефекты хвоста: хвосты короткие, множественные, в виде шпильки, сломанные, наклонные (угол больше 90°), неравномерная толщина хвоста, тонкая средняя часть, закрученный конец, закрученный полностью и их любая комбинация. При дифференцированном морфологическом подсчете учитываются только сперматозоиды с хвостами.

Тератозооспермия – увеличение количества патологических форм сперматозоидов выше референсных значений. Выраженная тератозооспермия резко снижает шансы оплодотворения и увеличивает вероятность пороков развития у плода, если оплодотворение произошло. Тератозооспермия обычно сочетается с олигозооспермией и астенозооспермией.

Сперматозоиды, у которых головка заключена в цитоплазматическую каплю, и те, у которых цитоплазматическая капля расположена на шейке в виде шарфа и по отношению к размеру головки составляет более 1/3, выделяются как незрелые или юные. В нормальной спермограмме они составляют около 1%.

Референтные интервалы

• Объем – 2,0 мл или более;
• рН – 7,2 или более;
• концентрация – 20 *106 сперматозоидов/мл или более;
• общее количество – 40 *106 сперматозоидов и более в эякуляте;
• подвижность – 50% или более подвижных (категория а+b); 25% или более с поступательным движением (категория а) в течение 60 мин после эякуляции;
• жизнеспособность – 50% или более живых, т.е. не окрашенных;
• лейкоциты – менее 1 *106/мл.

Классификация показателей эякулята

• Нормозооспермия – нормальный эякулят;
• олигозооспермия – концентрация сперматозоидов ниже нормативных значений;
• астенозооспермия – подвижность ниже нормативных значений;
• тератозооспермия – морфология ниже нормативных значений;
• олигоастенотератозооспермия – наличие нарушений всех трех показателей;
• азооспермия – нет сперматозоидов в эякуляте;
• аспермия – нет эякулята.

Источник: https://www.cmd-online.ru/vracham/spravochnik-vracha/analiz-eyakulyata-spermogramma/

Анализ спермы на инфекции (ПЦР-анализ): Особенности, Возбудители, Преимущества

• Особенности
• Возбудители
• Преимущества

Инфекционные заболевания, передающиеся половым путем (ИППП) — очень распространенная патология среди мужчин. Часто именно она является преградой на пути к зачатию и рождению здорового ребенка, так как инфекции ухудшают качество спермы и приводят к формированию воспалительных процессов в малом тазу.

Для диагностики ИПП могут брать мазок из уретры, либо эякулят. В первом случае полученный материал наносят на стекло и изучают под микроскопом. Этот метод является достаточно эффективным, но выявляет не все виды возбудителей. Во втором случае проводят ПЦР-анализ. Рассмотрим, что это такое, и какие возбудители можно выявить при помощи такого обследования.

Особенности

Многих интересует, показывает ли спермограмма инфекции. На самом деле нет, необходимо дополнительное исследование эякулята, которое называется метод полимеразной цепной реакции (далее ПЦР).

В отличие от исследования под микроскопом, при таком анализе лаборант оценивает фрагменты РНК и ДНК возбудителей, и сравнивает их с базой различных микроорганизмов. Осуществляется это при помощи специальных ферментов, в условиях специального прибора.

Такой аппарат носит название амплификатор или ПЦР-машина. Этот прибор создает специальный температурный режим, все время согревая и охлаждая пробирки. Таким образом удается получить очень точный результат.

Для ПЦР- анализа может использоваться не только сперма пациента, но и другой биологический материал, например, кровь, моча, мазок из уретры, спиномозговая жидкость. Вид биологического материала, который будет использован, зависит от типа возбудителя. Так для диагностики ВИЧ всегда берут крови, а для ЗППП могут взять и кровь, и сперму, и мазок.

Многих интересует, можно ли диагностировать ВИЧ по спермограмме. Сам анализ спермограммы не подразумевает обнаружения каких-либо инфекций, поэтому ответ будет отрицательным. Спермограмма помогает оценить подвижность сперматозоидов, количество эякулята, наличие в нем кровяных телец и лейкоцитов.

Возбудители

Благодаря ПЦР-диагностике в сперме могут быть обнаружены энтерококки (enterococcus sp), энтерококки фекальные (enterococcus faecalis), стафилококки (Staphylococcus) и другие возбудители. При помощи ПЦР-анализа можно выявить целый ряд различных микроорганизмов:

• хламидии;
• уреаплазма;
• гарднерелла;
• микоплазма;
• трихомонада;
• грибы кандида;
• вирус герпеса;
• вирус гепатита;
• Б-лимфотропный вирус человека (мононуклеоз);
• листерии;
• цитомегаловирус;
• ВПЧ;
• клещевой энцефалит и др.

Что интересно, такой анализ спермы может быть использован не только для диагностики инфекций, но и для подтверждения отцовства, либо для поиска преступника в криминалистике.

Анализ спермы на инфекции зачастую помогает установить причину бесплодия. Проблемы с фертильностью провоцируют трихомонады, хламидии, вирус герпеса, гонококки. Но и безобидные на первый взгляд стрептококки, стафилококки и кишечная палочка, которые удалось выявить по результатам спермограммы с ПЦР в небольших количествах, могут являться причиной патологии.

Дело в том, что если в сперме обнаружены возбудители, то скорее всего они уже обосновались в яичках, простате. Небольшое отклонение от нормы не является подтверждением воспалительного процесса. Но если иммунитет пациента немного подведет, то бактерии начнут активно размножаться.

Преимущества

ПЦР-анализ имеет ряд преимуществ:

• Самое главное преимущество — точные результаты. Так как изучаются не сами микроорганизмы, а их ДНК, то достаточно очень низкой концентрации, чтобы они были обнаружены.
• Плюсом является и то, что достаточно один раз сдать сперму, чтобы обнаружить сразу всех возбудителей.
• Не обязательно сдавать сперму, хоть и предпочтительно при бесплодии. Выявить инфекции чаще всего можно по анализу крови и мазку из уретры.
• Если исследование было осуществлено по всем правилам, то ошибка исключается.
• Еще одно достоинство ПЦР — быстрый результат. Длительность исследования составляет не более 7 часов.
• Процедура сбора материала неинвазивная, она не причиняет никаких неудобств.

Недостаток у исследования спермы на инфекции один — необходимость соблюдения целого ряда условий для получения точного результата. В первую очередь нужно правильно сдать сперму.

Осуществлять сбор биологического материала необходимо в условиях клиники в стерильный контейнер. Перед сдачей нужно исключить половые акты в течение 3-4 дней. Запрещается пить антибиотики несколько дней перед анализом, а также употреблять алкоголь.

На результат влияет профессионализм лаборанта, качество аппаратуры. При проведении исследования нельзя допускать  ошибок, иначе можно получить ложный результат.

Источник: https://Pro-MD.ru/ivf/infertility/male-factor/sperm-quality/analiz-spermy-na-infektsii/